В статье рассмотрены методы клинического исследования энтерина.
Ключевые слова: клинические исследования, энтерин, лекарственные препараты, диарин, антибиотики.
Болезни органов пищеварения у молодняка сельскохозяйственных животных, в том числе у телят, до сих пор встречаются во многих животноводческих хозяйствах, поражая более половины нарождающихся телят (Соколов В.Д., 1962; Аликаев В.А., 1974; Щербаков Г.Г., 1979; Ящин А.В., 1985; Урбан В.П., 1984; Фогель Л.С., 2004 и другие). Анализируя эпизоотологические данные двух животноводческих хозяйств.
Ленинградской области, Волосовского района - ЗАО «Ущевицы» и ОАО «Остроговицы» мы установили, что большинство нарождающихся телят в этих хозяйствах с первых же дней страдают диареями.
Выясняя причины возникновения такого количества диарей у новорожденных телят, и анализируя литературные данные по этому вопросу, установили, что у коров- матерей во время стельности в крови снижается содержание каротина и общего белка, в том числе гаммаглобулинов, ответственных за иммунологическое состояние организма. [1] Например, при физиологической норме каротина в зимний период от 4 до 7 г%. мы регистрировали в крови коров лишь 1,3 ± 0,06 г% а у отдельных животных менее 0,5 г%. Таким образом, одной из причин проявления диарей у новорожденных телят можно считать авитаминозные и иммунодефицитные состояния организма. Эти негативные процессы одновременно усугубляется высокой молочной продуктивностью коров (более 8000 кг). Подобное положение подтверждается многими исследователями (Аликаев В.А.,1974; Анохин В.М.,1980; Урбан В.П.,1981; Карпуть И.М. и соавт., 1983; Ноздрин Г.А., 1991; Апатеико В.М., 1992 и др.).
Одновременно с этим у больных диареей телят снижалась интенсивность фагоцитоза (по фагоцитарному индексу, табл.1) и наблюдалась тенденция уменьшения бактерицидной активности сыворотки крови и Ig G. Одновременно с этим в крови больных телят.
Таблица 1
Иммунологические показатели здоровых
и больных диареей телят (М±m)
Группы животных Лизоцим, % БАС, % Ig G, г/л Фагоцитарный индекс
Здоровые 20,7 ± 1,3 23,4 ± 1,2 13,1 ±0,7 6,7 ± 0,4*
Больные 21,4 ± 1,7 22,5 ± 1,7 12,3 ±0,8 5,1 ±0,3
При определении гематологических показателей констатировали, что количество форменных элементов крови у больных и здоровых телят было почти одинаковым. Наблюдалось тенденция некоторого увеличения количества эритроцитов у больных телят и замедление СОЭ. Что можно объяснить обезвоживанием организма («сгущение крови»).
Таблица 2
Гематологические и некоторые биохимические показатели крови
здоровых, больных диареей и леченных энтерином телят (М±m)
Показатели Группы телят
здоровые больные после лечения
Эритроциты, х1012/л 6,5 ± 0,3 7,1 ± 0,3 6,7 ± 0,2
Лейкоциты, х 109/л 8,9 ± 0,4 12,4 ± 0,4* 9,8 ± 0,3
Гемоглобин, г/л 109 ± 6,3 115 ± 5,7 107 ± 7,1
Общий белок, г/л 71,0 ± 3,1 65 ± 3,7 68 ± 0,31
СОЭ, через 1 час 0,8 ± 0,03 1,2 ± 0,09 0,9 ± 0,03
Глюкоза, ммоль/л 4,9 ± 0,2 5,8 ± 0,2 5,3 ± 0,1
По мнению многих авторов (Захаров П.Г.,1998; Волков Г.К.,2000 и др.) на возникновение диарей у телят влияет человеческий фактор (неудовлетворительная работа и халатность животноводов: телятниц, доярок, скотников). В этом мы могли убедиться сами при изучении профилактической эффективности энтерина у новорожденных телят. В одном из опытов при назначении препарата мы тщательно следили за соблюдением зоогигиенических правил при выращивании телят с момента их рождения, подключив к этому контролю зооветспециалистов и бригадиров. В этом опыте профилактическая эффективность энтерина и диарина составила 96%, тогда как в целом по двум хозяйствам (когда не было такого тщательного контроля) она была около 90%.
Видимо из-за полиэтиологичности данной патологии, трудно подобрать эффективные лекарственные средства для ее профилактики и лечения. Вот почему в этих целях используется большое количество препаратов разных фармакологических групп. При этом па первое место пока выходят антибиотики, хотя имеются более эффективные комплексные препараты, например лере, разработанный в ВГНКИ ветпрепаратов и диарин, разработанный в ООО «НИИВФ Эврика». Однако лерс не совсем удобен технологически для применения, комплексный метод терапии с
использованием многих препаратов, в основном приемлем для лечения тяжелых, токсических диарей, а производство диарина резко сократилось из-за резкого повышения стоимости одного из ингредиентов - диоксидина.
Учитывая выше изложенное, перед нами была поставлена цель - разработать новый антидиарейный препарат, который бы по эффективности не уступал диарину, но был дешевле его. Таким лекарственным средством стал комплексный препарат энтерин, разработанный в ООО «НИИВФ Эврика» при нашем участии.
При создании энтерина было учтено большинство из этих этиопа-тологических факторов, взяты лекарственные вещества, воздействующие на основные мишени патологического процесса, проявляющие местное и резорбтивное действие. При этом диоксидин был заменен натрия хлоридом, а все остальные компоненты диарина остались аналогичными и в таком же составе.
Гипертонические растворы натрия хлорида (3-5-10%) концентрации проявляют антимикробное, противовоспалительное, очищающее раны от слизи и гноя действием, воздействуют на патогенную и условно-патогенную микрофлору кишечника, благодаря чему способствуют нормализации микробного пейзажа. Препарат издавна применяется в ветеринарии наружно (для лечения ран) и внутрь (при воспалении слизистых оболочек кишечника). По данным П. Д. Евдокимова (1970) натрия хлорид при внутреннем применении раздражает рецепторы, усиливает секрецию слюнных и желудочно-кишечных желез, активирует перистальтику, а также усиливает всасывание питательных веществ, повышает аппетит и улучшает процессы пищеварения. В гипертонических растворах действует антисептически, противокатарально, противобродильно и противогни-лостно. Внутрь назначают для улучшения аппетита и нормализации процессов пищеварения [1; 2].
По сообщению И.Е. Мозгова (1985) при воспалении слизистых оболочек натрия хлорид в изотонических или слабогипертонических растворах разжижает (растворяет) слизь, улучшает рассасывание продуктов воспаления и ускоряет заживление. Кроме того, он незначительно усиливает перистальтику и повышает всасываемость питательных веществ в кишечнике.
Таким образом, энтерин представляет собой жидкость, состоящую из молочной кислоты (антимикробное, противовоспалительное и нормализующее процессы пищеварения действие), метилурацила (адаптогенное, иммуностимулирующее действие) и натрия хлорида.
Вначале определяли фармацевтическую совместимость ингредиентов. В этих целях препараты, согласно рецептуре растворяли в дистиллированной воде, смешанной с 40% молочной кислотой в соотношении 6:1. Установили, что все препараты хорошо растворялись в этой смеси, образуя истинный раствор светло-соломенного или соломенного цвета, в зависимости от цвета молочной кислоты, без каких-либо осадков и помутнения.
Фармакологическую совместимость компонентов определяли косвенно, при выяснении возможного побочного действия. В этих целях, после определения условно-оптимальной дозы (за основу была взята доза диарина - 0,3 мл/кг) группам лабораторных животных задавали комплексный препарат и отдельные компоненты, входящие в состав энтерина.
Установили, что как по отдельности, так и в целом ингредиенты не проявляли регистрируемых нежелательных эффектов на организм лабораторных животных (белые мыши и крысы).
При изучении антимикробного действия энтерина выяснили, что препарат в концентрации 0,5% ингибирует рост кишечной палочки, следовательно, проявляет антимикробный эффект. Это подтвердилось и при экспериментальном колибактериозе белых мышей и белых крыс. Препарат в дозе 0,3 мл/кг проявлял профилактическое (75%, в зараженном контроле заболели все мыши) и лечебное действие (85%, в зараженном контроле 45%). При экспериментальном колибактериозе белых крыс лечебная и профилактическая эффективность энтерина составила 50%. Антимикробное действие подтвердилось и в опыте по методике В.М. Земского и соавт. (1977) Авторы установили, что иммуностимулятор РНК повышает устойчивость различных тканей внутренних органов белых мышей, к эшерихиям. Аналогичный опыт мы провели на белых крысах, которым за 7 дней до заражения назначали энтерип 2 раза в день, в дозе 0,3 мл/кг'.
Оказалось, что содержание эшерихий в органах и тканях контрольных белых крыс (кровь, печень, селезенка, почки) было примерно одинаковым и составляло 900-1000 КОЕ в 1 мг. У подопытных крыс содержание эшерихий в указанных органах было в половину меньше и колебалось в пределах 450- 530 КОЕ. Полученные данные кроме В.М.Земского и соавт., согласуются с результатами опытов Н.Л.Андреевой (1992). Данный опыт подтверждал не только иммуностимулирующее действие энтерина, по и его антимикробную активность.
Адаптогенные свойства энтерина выяснили в опыте при стрессировании белых крыс на шуттель-аппарате (механический, транспортный стресс). Оказалось, что уже через 1 ч после стрессирования животных у них проявлялась тенденция к увеличению показателей стрессовой реакции организма. Через 24 ч увеличение таких показателей, как глюкоза и количество лейкоцитов в крови белых крыс, которым не задавали энтерин, были статистически достоверными, что продолжалось до 2-х суток. Аналогично изменялось и содержание общего белка в крови стрессированных, не леченных животных, с той только разницей, что это количество снижалось, причем также достоверно па протяжении 2-х суток. На третьи сутки показатели, характеризующие стрессовую реакцию, нивелировались и на четвертые сутки уже не отличались от здоровых контрольных животных. Одновременно установили, что стресс значительно снижал живую массу животных, которая восстанавливалась значительно медленнее, чем стрессовые показатели крови [2]. На рисунке 1 представлены данные о влиянии энтерина на показатели глюкозы в крови при стрессе.
Полученные данные согласуются с результатами опытов А.А. Сухинина и соавт. (1989), А.А. Касаткина (1990), М.Э. Онуфриепко (1995), В.Д. Войтенко, Т.Б. Смирновой (1997).
Иммуностимулирующие свойства энтерина определяли с помощью цитостатика циклофосфана. Предварительно подопытным крысам одной группы в течение 7 дней задавали энтерин в дозе 0,3 мл/кг, 2 раза в сутки. Второй подопытной группе энтерин не задавали. Третья группа служила контролем. За крысами наблюдали в течение 30 дней, определяя в крови общий белок, иммуноглобулин G, лейкоциты, в том числе лимфоциты. На 15 день от начала эксперимента у крыс, которым инъецировали цитостатик, наступало иммунодефицитное состояние. Содержание общего белка в крови снизилось с 29,7 г/л до 17,9 г/л. Уменьшилось процентное содержание иммуноглобулина G на 38%. Снизилась активность лизоцима на 27% и количество лейкоцитов па 24%. Одновременно с этим снизилась и живая масса крыс (уменьшился прирост живой массы) на 22%. В тоже время на этом фоне достаточно наглядно проявились корректирующие (иммуностимулирующие) свойства энтерина. Хотя у крыс и в этой группе наблюдалось снижение иммунологических показателей, но они были менее выражены и практически приближались к таковым контрольных животных. На 30 сутки эксперимента все иммунологические показатели в обеих подопытных группах восстанавливались до физиологических значений.
В дальнейшем иммуностимулирующие свойства энтерина были подтверждены при экспериментальном колибактериозе белых крыс и в опыте по методике В.М Земского и соавт. по снижению обсемененности органов и тканей животных кишечной палочкой. Можно предположить, что это снижение происходит как за счет как антимикробного действия энтерина, так и благодаря его иммунотропной активности. Наши данные согласуются с результатами В.М. Земского и соавт.(1977) и Н.Л. Андреевой (1992).
Для выяснения ростостимулирующего действия энтерина его задавали в дозе 0,3 и 0,15 мл/кг. Препарат в обеих дозах увеличивал темпы роста животных, при этом большую эффективность регистрировали при назначении энтерина в заниженной дозе. Так, например, увеличение живой массы белых крыс в подопытных группах составляло: при дозе 0,3 мл/кг 103% и при дозе 0,15 мл/кг 105% по отношению к контролю.
Одновременно с этим в крови подопытных животных наблюдалась тенденция увеличения эритроцитов, гемоглобина, общего белка, лизоцима и бактерицидной активности сыворотки крови. Лучшие показатели регистрировались у животных, получавших заниженную дозу энтерина.
Более сильное ростостимулирующее действие энтерин проявлял на белых мышах. Так, например, увеличение живой массы белых мышей в подопытных группах составляло: при дозе 0,3 мл/кг 106% и при дозе 0,15 мл/кг 109% по отношению. Данные оказались статистически достоверными (р <0,05). Одновременно с этим, при дозе 0,6 мл/кг прирост живой массы белых крыс был таким же, как у животных контрольной группы.
При определении острой токсичности энтерипа, в частности ЛД50 и ЛД100 нам не удалось установить эти показатели, поскольку максимально вводимые разовые дозы препарата (для белых крыс - 2,8 мл) не вызывали гибели лабораторных животных. В силу этого гипотетическая ЛД50 для крыс была более 14000мг/кг, что говорит об очень низкой токсичности препарата, если учесть тот факт, что до токсической классификации препараты, у которых ЛД50 превышает 1000 мг/кг относятся к малотоксичным соединениям.
В подостром опыте препарат задавали на протяжении 30 дней подряд в дозах в 2 и 4 раза превышающих оптимальные, т.е. 0,3; 0,6; и 1,2 мл/кг. Учитывали прирост живой массы, рост и развитие внутренних органов, гематологические и некоторые иммунобиохимические показатели, увеличение дозы диарина в 2 и 4 раза по сравнению с оптимальной практически не влияло па гематологические показатели и содержание глюкозы в крови белых крыс при месячном назначении препарата. В то же время проявлялась некоторая тенденция снижения содержания гемоглобина и увеличения лейкоцитов в крови белых крыс, получавших дозу диарина в 4 раза превышающую оптимальную по сравнению с животными, получавшими оптимальную дозу и контрольными животными. Однако эти различия оказались статистически недостоверным.
Прежде чем проводить производственные испытания энтерина, препарат проверили в локальном опыте на небольшой группе больных диареей новорожденных телят, испытав 3 дозы: 0,3; 0,6 и 1,2 мл/кг в остром опыте и дозу 0,3 мл/кг па протяжении 10 дней подряд в субхроническом опыте. Выяснили, что в остром опыте при всех используемых 3-х дозах энтерина, не наблюдали никаких нежелательных отклонений в поведении животных. При выяснении возможной субхронической токсичности энтерина, проведенной па больных диареей телятах установили, что все телята поправились в течение 2-4 дней (в среднем 2.7 + 0,1 дня). Тогда как при лечении 10-и контрольных телят антибиотиками, регидратационными и вяжущими средствами срок лечения был от 3 до 6 дней (в среднем 4,1 + 0,2) и 1 теленок пал. При этом двум телятам пришлось применить интенсивную терапию с использованием регидратационных средств, витаминов, сердечных препаратов и других симптоматических средств. Обращает на себя и такой факт, что после 10-и дневного применения энтерина в крови выздоровевших телят регистрировали большее количество белка, эритроцитов, гемоглобина и некоторых показателей естественной резистентности организма (табл. 3).
Таблица 3
Некоторые показатели крови телят в зависимости от лечении энтерином и лекарственными средствами, применяемыми в хозяйстве (М±m)
Группы животных Лизоцим, % Ig G, г/л Эритроциты, х1012/л Общий белок. г/л
Энтерин 21,5 ± 1,4 14,1 ± 0,8 6,7 ± 0,4 61,3 ± 3,1*
Комплекс препаратов 21,9 ± 1,8 12,7 ± 0,9 5,8 ± 0,3 50,5 ± 2,9
Примечание: *результат достоверный (р ≤ 0,05)
Эти данные дополнительно подтверждают безвредность энтерина для новорожденных телят и одновременно его достаточную лечебную эффективность. Кроме того, подтвердили, что выбранная доза энтерина 0,3 мл/кг является вполне эффективной при диарее и может быть отнесена к оптимальной при дайной патологии.
Эффективность энтерина при экспериментальном колибактериозе лабораторных животных, его иммуностимулирующее, адаптогенное и ростостимулирующее действие при отсутствии отрицательного влияния на организм животных, дали основание для проведения производственных испытаний препарата. Опыты провели в 2-х хозяйствах Ленинградской области, Волосовского района - ЗАО «Ущсвицы» и ОАО «Остроговицы» на поголовье 1151 теленок. Энтерин применили 367-и телятам, в том числе с профилактической целью - на 154 телятах и с лечебной целью на 213 телятах. Препарат сравнивали с диарином (167 голов, в том числе 90 с лечебной целью и 77 с профилактической целью и химиопрепаратами с вяжущими и другими лечебными средствами – антибиотиком левомицетином и фторхинолоном байтрилом па поголовье 617 голов. Профилактическая эффективность энтерина составила 88,7% (у диарипа 90%), лечебная - 93% (у диарина - 95%). Профилактическая эффективность химиопрепаратов составила 80% и лечебная 75%.
Таблица 4
Профилактическая эффективность препаратов при диареях телят
Наименование
групп Кол-во
голов Заболело
(голов) % Пало
(голов) %
Энтерин 154 18 11,68 - -
Байтрил 100 21 21 2 2
Диарин 77 6 7,79 - -
Антибиотик 125 25 20 3 3
Контроль 50 40 80 2 4
Из 213 телят, которых лечили энтерином 15 голов (7%) переболевало тяжело. Этим телятам пришлось применить интенсивную терапию с использованием солевых растворов, энроксила, строфантина и гепарина (комплексный метод лечения токсических диспепсий, разработанный на кафедре внутренних незаразных болезней СПбГАВМ). В группе телят, которых лечили методом принятом в хозяйстве примерно из этого количества интенсивную терапию пришлось применить 52 телятам (25%). В обоих случаях лечение оказалось эффективным. В группе, которым ранее применялся энтерин не пал ни один теленок, во второй группе пало 3 теленка (6%).
Применение энтерина и диарина способствовало повышению обшей сохранности молодняка и в дальнейшем снижению бронхопневмоний у телят старших возрастов.
Проведенные исследования показали, что вновь созданное антидиарейное средство - энтерин, обладает выраженным профилактическим и лечебным эффектом при диареях новорожденных телят и по этим показателям приближается к диарину (профилактическое действие почти одинаковое, лечебное несколько меньшее). В тоже время энтерин дешевле диарина и несколько экологичнее последнего. Новый препарат оказался эффективнее антибиотика левомицетина и фторхинолона байтрила и использование энтерина оказалось экономически выгоднее, не говоря уже об экологическом преимуществе [7; 8]. Расчеты показали, что при использовании химиопрепаратов стоимость затрат на одного теленка составила 74 рубля, тогда как при назначении энтерина - 23 рубля, то есть в три раза меньше (рис.3).
Кроме того, энтерин проявлял позитивное фармакологическое последействие при дальнейшем выращивании телят (табл. 5).
Таблица 5
Прирост массы и возникновение бронхопневмоний у телят в зависимости от лечения диарей (возраст 30 дней) (М±m)
№
п/п Группы, препараты Живая масса,
кг Возникновение бронхопневмоний,
%
1. Контроль 54,3± 1,7 5,7
2. Препараты хозяйства 54,1± 1.6 5,9
3. Энтерин 55,1± 1,4 4,3
Таким образом, при назначении энтерина, телята лучше росли и развивались и их организм был более устойчив в возникновении легочных болезней, по сравнению с применением антимикробных препаратов для лечения диарей [8].
3. ВЫВОДЫ
1. Разработано новое эффективное, экологически чистое антидиарейное средство, специально для новорожденных телят, по эффективности приближающееся к диарину, но дешевле его.
2. Энтерин проявляет антимикробное, иммуностимулирующее, адаптогенное и ростостимулирующее действие, чем и объясняется его антидиарейный эффект.
3. Профилактическая эффективность энтерина при диареях новорожденных телят составляет 87%. лечебная - 92,3%, тогда как у антибиотика левомицетина и фторхинолона байтрила эти показатели составляют соответственно 75 и 83%.
4. Энтерин обладает более сильным позитивным фармакологическим последействием по сравнению с химиопрепаратами. Это действие проявляется более быстрым ростом и развитием телят до месячного возраста и уменьшением бронхопневмоний у растущих животных.
5. Применение энтерина при профилактике и лечении диарей у новорожденных телят значительно дешевле, чем использование для этих целей химиопрепарата. Стоимость лечения химиопрепаратами одного теленка составляет 74 рубля, а при назначении энтерина 23 рубля.
6. Токсикологические исследования показали безвредность энтерина для лабораторных животных и телят
7. Производству предложены рекомендации по применению энтерина для профилактики и лечения диарей у новорожденных телят.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Аликаев В.А. Острые желудочно-кишечные заболевания молодняка с/х животных / В.А. Аликаев // Проф. И леч. Заболеваний молодняка с/х животных. – Науч. Труды ВАСХНИЛ. М. – 1974. – С72-78.
2. Андреева Н.Л. Общность действия иммуностимуляторов, адаптогенов, стимуляторов продуктивности и антистрессовых средств / Н.Л. Андреева // Матер. 9 межгос. науч.-практ. конф. «Новые фармакологические средства в ветеринарии». - СПб., 1997. – С. 100-101
3. Анохин Б.М. Профилактика болезней телят. / Б.М. Анохин // Изд. ЦЧЗ. – 1980. – 214с.
4. Анохин Б.М. Болезни молодняка с/х животных. / Б.М. Анохин // Воронеж. гос. агроунивер. вет. фак. Воронеж. – 1996. – 214с.
5. Божко В. И. Терапия и профилактика диспепсии у поросят / В.И. Божко // Борьба с болезнями с.-х. животных/ Сб. науч. Тр. Харьковского зооветеринарного института. – 1972. – Вып. 168. – С.10-15.
6. Власова Л.М. Лечебно-профилактические свойства антидиарейного средства - энтерин / Л.М. Власова // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Мат. XIX междунар. межвуз. науч.-практич. конф. - СПб., 2007. -С.9-10.
7. Власова Л.М. Применение диарина и энтерина при диареях новорожденных телят / Л.М. Власова, О.Г. Петрова, Н.П. Усмонова // Перспективы и преимущества применения ветеринарных препаратов и пищевых добавок па основе молочной кислоты: Матер, семинара. - СПб., 2008. - С.29-30.
8. Власова Л.М. Производственные испытания энтерина при диареях новорожденных телят / Л.М. Власова // Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии: Матер. Всероссийского Съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов. - СПб., 2009. - С. 19-20.
Заявка
Фамилия, Имя, Отчество Власова Лидия Михайловна
Место работы (полное наименование учреждения (точное официальное название) Лужский институт (филиал) ЛГУ им. А.С. Пушкина
Факультет (для сотрудников вузов) Биотехнологический
Кафедра (для сотрудников вузов), лаборатория (для сотрудников НИИ) Биотехнологии, технологии производства сх продукции
Должность Доцент
Ученая степень (при наличии) Кандидат наук ветеринарной медицины
Ученое звание (при наличии)
Почтовый адрес, на который следует выслать сборник (с указанием индекса)
Контактный телефон (желательно мобильный) 8 911 273 95 99
e-mail каждого автора
Тематическое направление конференции Биотехнология, сельское хозяйство
Название статьи
Количество страниц в статье 14
Форма участия (заочная / очная с докладом / очная без доклада)
Потребность в технических средствах (ДА / НЕТ, если «ДА», то какое)
Необходимость печатного экземпляра сборника (ДА / НЕТ, если «ДА», то количество) Да – один экз.
Необходимость отправки электронного варианта сборника (ДА / НЕТ)
Спин-код автора (при наличии) для постатейной привязки в РИНЦ
Требуется ли размещение в гостинице (ДА / НЕТ)
Источник информации о конференции
